中药山银花的HPLC/UV/MS指纹图谱研究
Study on HPLC/UV/MS fingerprint
map of the TCM flos lonicerae confusae
陆敏强 黄辉庆
（广东省中医院，广东 广州，510120）
中图分类号：R228 文献标识码：A 文章编号：1674-7860（2010）13-0012-02
【摘 要】 目的：探讨HPLC/UV/MS技术在中药山银花的指纹图谱研究中的效果。方法：采用Phenomenex Luna C18色谱柱（250mm×4.6mm，5m），采用0.1%的乙腈和甲酸水溶液对流动相以0.5ml/min的流速进行梯度洗脱；采用电喷雾离子阱质谱（ESI-ITMS），对样品进行正负离子二级扫描，并对结果加以分析。结果：得到了重复性和分离度均非常好的山银花药材的HPLC /UV指纹图谱及HPLC/MS指纹图谱，分别对山银花药材的两种指纹图谱中的五个色谱峰进行了初步的定性分析。结论：HPLC /UV/MS技术在中药山银花的指纹图谱研究中的效果较佳，值得应用和推广。
【关键词】 山银花；HPLC；UV；MS
【Abstract】 Objective: To investigate effect HPLC/UV/MS study on HPLC/UV/MS fingerprint map of the TCM flos lonicerae confusae. Methods: Taking Phenomenex Luna C18 chromatogram column (250mm×4.6mm, 5m), taking acetonitrile 0.1% and the formic acid and mobile phase with a flow rate of 0.5ml/min conduct gradient elution; taking ESI-ITMS, samples were 2 scanned, analysis the result. Result: Have a good HPLC/UV and HPLC/MS fingerprint map. Conclusion: Effects was better of the study on HPLC/UV/MS fingerprint map in the TCM flos lonicerae confusae.
【Keywords】 Flos Lonicerae Confusae; HPLC; UV; MS
山银花（Flos Lonicerae Confusae），别名山花、南银花、山金银花、土忍冬、土银花。忍冬科植物，红腺忍冬、毛柱忍冬、灰毡毛忍冬或华南忍冬干燥花蕾及带初开放的花朵。性味甘寒，具有清热解毒、凉散风热的功效。常用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温热发病的治疗[1]。为了探讨HPLC/UV/MS技术在中药山银花的指纹图谱研究中的效果，我们对从中药市场上购买而来的山银花药材采用Phenomenex Luna C18色谱柱加以分析，收到了较好效果，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器：Waters 2695高效液相色谱仪（由美国沃特世科技公司提供，装备2996个二极管阵列检测器）；Finigan LCQTM离子阱质谱仪（由美国菲尼根质谱公司提供）；十万分之一精度分析天平（由常州诺基仪器有限公司提供）；禾创超声KH系列台式医用数控超声波清洗器（由昆山禾创超声仪器有限公司提供）。
试剂：醋酸、乙腈（色谱纯，由美国飞世尔科技公司提供）；甲醇、石油醚（分析纯，由武汉化工厂提供）；二次去离子水（实验室制备）。
1.2 样品制备
所选山银花药材购于广州清平中药市场，经华南植物研究所叶华谷教授鉴定为山银花Capr ifoliaceae Lonicera confusa DC，产地为山东省临沂市；取适量的山银花药材，60℃干燥4h，粉碎，过40目筛。取2g药材粉末置于100ml锥形瓶中，加50%甲醇40mL，超声漂洗0.5h后过滤取滤液。所得滤液用0.45mm微孔滤膜再次滤过，已作为供试品溶液。
1.3 色谱条件
色谱柱：Phenomenex Luna C18色谱柱（250mm×4.6mm，5m）。
流动相：0.1%的乙腈和甲酸水溶液。
洗脱梯度：0～42min（0%乙腈溶液～12%乙腈溶液），42～65min（12%乙腈溶液～19%乙腈溶液），65～100min（19%乙腈溶液～1005乙腈溶液）。
流速：0.5ml/min。
柱温：25℃。
检测波长：254nm。
1.4 质谱条件
采用电喷雾离子阱质谱（ESI-ITMS），对样品进行正负离子二级扫描。通过设置时间程序，自动记录1h内的二级总离子流图，正负离子扫描图。干燥气体的流速设定为7L/min，温度设定为350℃。扫描质量范围设定为50～1000amu，毛细管电压设定为3.5kV，雾化气压设定为25psi。
2 结 果
经过实验，我们得到了分离度和重复性均较好的山银花药材HPLC/UV及HPLC/MS指纹图谱，山银花药材的HPLC/UV指纹图谱见图1所示，HPLC/MS指纹图谱见图2及图3所示。
3 讨 论
由卫生部在2000年出版的《药典》中规定，金银花和山银花统称金银花，两品都可作金银花使用。但实际情况是，金银花的价格持续走高，长期在35元每公斤左右徘徊，而山银花的价格持续走低，长期在9元每公斤左右涨跌，这就使许多药厂为了降低成本，都使用山银花替代金银花。
2005年，卫生部终于在新版的《药典》将两品分列两项，体现了新药典的合理性和科学性，因为金银花和山银花毕竟在在来源、性状、成分及含量等方面都有着很大的不同。在来源上，金银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花。山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬或华南忍冬的干燥花蕾或带初开的花。在性状上，金银花呈棒状，上粗下细，略弯曲，表面黄白色或绿白色，密被短柔毛。而山银花呈棒状而销弯，表面绿棕色至黄白色。总花梗集结成簇。开放者花冠裂片，不及全长之半，质稍硬，手捏之稍有弹性，气清香，味微苦甘。在成分及含量上，金银花含绿原酸及木樨草苷，山银花含酸原酸，2005年版《药典》规定，金银花含绿原酸不得少于1.5%，含木樨草苷不得少于0.10%，山银花含绿原酸不得少于1.5% [2-3]。
新版药典2005年7月1日开始实施以后，中药处方以及各种饮片、提取物如冠以金银花名称，将只能以忍冬科忍冬为原料，否则将是不合法的。各种保健品今后也不得将山银花、毛花柱忍冬等冠以金银花之名。换言之，如果把山银花当作金银花卖，就是以假乱真，坑害农民。
近年来，随着现代分析方法。检测手段的不断进步及对中药系统研究的不断深入，在阐明中药化学成分的多样性和复杂性方面取得了很大的进展，中药指纹图谱的出现，就为解决金银花和山银花的质量控制问题带来了希望。这是一种综合的鉴别手段，它建立在中药成分系统研究的基础上。早在20世纪70年代就有学者尝试用TLCS对中成药进行分析，因技术和时机不成熟而没有得到学界的关注。
当前色谱技术的多样化和检测能力的增强为指纹图谱研究和应用提供了良好的工作平台。目前，中药指纹图谱技术已涉及众多方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、高效毛细管电泳法（HPCE）等色谱方法，紫外光谱法（UV）、红外光谱法（IR）等光谱方法，此外还有质谱法（MS）、薄层扫描（TLCS）、核磁共振法（NMR）和X射线衍射法等方法，但色谱技术目前已经是绝对的主流。尤其是HPLC、HPLC-MS和HPLC-UV已是公认的三种常规的分析手段。随着科学技术的发展，色谱分析仪器不断的完善与提高，在克服自身固有缺陷，发挥自身优势方面有了长足发展。其中HPLC技术随着新的高效通用型检测器的发展，其适用性和灵敏度已经显著提高，使复杂样品的分析成为可能。这些新设备新技术的应用，将使中药及其制剂指纹图谱的建立更加有效。
目前，HPLC-MS和HPLC-UV指纹图谱已成为国际上公认的控制中药或天然药物质量的最有效手段。美国FDA、英国草药典、德国药用植物学会、加拿大药用植物学会、印度草药典等机构均接受色谱指纹图谱的质控方法。国家药品监督管理局于2000年第四季度下发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》，率先要求中药注射剂推行指纹图谱的质控办法，这将极大促进我国中药质控的发展[4-5]。
参考文献：
[1]黄丽瑛,吕植桢,李继彪,周炳南.中药金银花化学成分的研究[J].中草药,
1996,11(3):258
[2]黄西峰.金银花的研究概况及展望[J].中国中药杂志,1997,18(3):198
[3]粟时颖,郑兴,廖端芳.山银花研究进展[J].南华大学学报(医学版),2009,11 (10):70
[4]赵刚,杜玮,魏玉辉,姚小军,武新安.银黄制剂的HPLC-ELSD指纹图谱研究[J].中草药,2009,11(3):258
[5]徐英宏,姜清华,菅凌燕,李玉灵.赤丹胶囊的HPLC指纹图谱研究[J].中草药,2009,1(2):77
作者简介：
（1979-），男，本科，中药师，从事医院药材质量控制工作。
编号：ZZ-10052810（修回：2010-07-06）
